讲述色谱柱的故障诊断与维护(ppt 33页)

目录：
I.  常见问题， 现象及排除方案
- 基线漂移/噪音
- 峰型
- 压力变化
- 保留漂移
II. 日常维护/ 良好的实践
- 在线装置
- 样品制备
- 操作的限制
III. 再生/维修已损坏的色谱柱
-物理方法
-化学方法

 

基线漂移
可能的原因：
 梯度洗脱
 温度不稳定 (示差检测器）
 流动相中有污染物
 柱中的流动相没有平衡
 体系中有污染物流出
压力
I.  不进样时柱压连续升高
- 泵密封垫
- 流动相有颗粒
- 流动相溶解性
- 流动相的不稳定性 (聚合)
- 形成柱死体积 (与使用条件有关)
II.  进样时压力升高
- 样品有颗粒
- 样品在流动相中不溶
- 样品组分与固定相不兼容
保留值漂移
I.  所有峰都向低保留值方向漂移（酸、碱、中性化合物）
- 键合相流失
- 流动相不稳定 (可能性较小)
- 溶剂输送系统 (流速变化)
II.  所有峰都向高保留值方向漂移
- 在水/有机溶剂的混合体系中，有机溶剂含量减少
- 柱改变 (可能性较小)
- 溶剂输送系统 (流速变化)
III. 离子型化合物的色谱峰的保留值漂移
-流动相中挥发性组分损失 (离子强度, pH 漂移)
- 柱改变 (键合相或污染)
I.  与流动相有关的问题
- 使用新鲜的流动相
  ?pH
  ?电导
  ?色谱性能测试
II.  与色谱柱有关的问题
- 测试新柱
- 用标准的测试混合样测试新柱
- “清洗” 色谱柱后再测
- 考虑样品基质与使用条件对柱稳定性的影响
色谱柱的修复与再生 --
                                 物理性阻塞
在安装柱前后测试压力差
如果柱压力太高，反装色谱柱，并用10-20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱，监测压力变化
若出现沉淀 (如：蛋白凝聚、细胞物、聚合物) 设法用相应的可溶性溶剂，如 0.1% TFA / 80% 乙腈, 6M 盐酸胍, THF, HFIP
若仍无效，应考虑更换过滤片

 

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