葡萄酒中苹果酸的测定(doc 16页)

原理:
利用MegaQuantTM (专利技术)测定L-苹果酸需要进行三步酶解反应，第一步：在L-苹果酸脱氢酶(L-MDH)的催化作用下，L-苹果酸被烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)氧化生成草酰乙酸：
(1) L-苹果酸 + NAD+   (L-MDH)   oxaloacetate + NADH + H+
第二步：加入过剩的L-谷氨酸，在谷草转氨酶的作用下，生成L-天门冬氨酸和2–酮戊二酸
(2) Oxaloacetate + L-glutamate       L-aspartate + 2-oxoglutarate

第三步：在心肌黄酶的催化作用下，NADH还原碘硝基氯化四氮唑(INT)，生成甲基- INT
(3) NADH + INT + H+     (diaphorase)        NAD+ +甲基-INT
生成的甲基- INT的量取决于L-苹果酸的量，甲基- INT的吸光度值可在505nm下测量。
特异性, 灵敏度, 测量范围和精确度:
该实验方法是专门用于测定L-苹果酸含量的。
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