应用限制性显示技术制备HCV cDNA诊断基因芯片探讨(pdf 6页)

应用限制性显示技术制备HCV cDNA诊断基因芯片探讨内容提要：
制备丙型肝炎病毒(HCV)检测芯片并进行验证、初步检侧质量评价.采用限制性显示(Restriction (1iyday.
RI))技术制备芯片探针，从载体pCV-J4IfiS中切出HCV全长cDNA, Sau3A I酶消化，所得的限制性片段进行RD-PCR
扩增，经聚丙烯酸胺电泳(PACE.)结合银染法进行分离。切胶回收后作3次PCR.得到较纯净的HCV cINA限制性
片段.扩增后的产物克隆至pM1)18-T载体进行快速鉴定。将筛选出的限制性片段打印在氨基修饰的玻片上制备
成检测芯片进行杂交验证分析.对芯片检测进行优化、初步的质量评估.运用RI)技术.得到24个200一800坤、大
小均一的基因片段，序列分析表明，均属于HCV特异基因，可以作为诊断芯片探针;杂交、侧序结果显示，芯片检测
的敏感性、特异性、准确度、重复性、线性等指标均佳。利用RD技术制备基因芯片探针是一种快速、简便的实用方
法:制备的诊断芯片可以用于检侧HCV RNA.具有敏感、检测结果较为可靠的优点。

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