根瘤菌质粒的快速检测‘.ppt12

根瘤菌质粒的快速检测
目的要求
实验材料
实验程序
思考题
目的要求
了解根瘤菌质粒的有关特性

学习并掌握根瘤菌质粒的快速检测方法
实验材料Ⅰ
PA液体培养基：                                                     
   蛋白胨4g、MgSO4•7H2O  5g、dH2O（蒸馏水）1000mL、pH 6.8—7.0。
TY固体培养基：                                                                              胰蛋白胨5g、酵母粉3g、CaCl2•6H2O  1.3g、dH2O  1000mL、pH7.0。
10 X TBE电泳缓冲液：                                                             Tris108g、H3BO3  55g、EDTA  9.3g、dH2O  1000mL、pH 8.3。
Tris-蔗糖溶液：                                                                              蔗糖25g、0.025mol• L-1Tris-HCl（pH8.0）100mL、高压灭菌后40C保存。
RNA酶缓冲液： Tris-HCl（ pH7.5）10m mol、NaCl 15 m mol、高压灭菌后40C保存。
实验材料Ⅱ
RNA酶溶液：RNA酶（Ribonuclease A，Sigma公司产品）4mg、 RNA酶缓冲液10mL、分装于小管中，1000C水浴中处理15min以灭活DNA酶，-200C保存。
溶菌酶溶液：溶菌酶（Lysoxyme，Sigma公司产品）100mg、灭菌双蒸水（d2H2o）5mL、分装于小管中，每管50L，-200C保存。
裂解液（临用前配制）： Tris-蔗糖1mL（用后归于40C）、溶菌酶溶液（20mg/mL）50L、 RNA酶溶液（400 g/ mL）50L、溴酚蓝指示剂1—2滴。

..............................