基因功能分析的基本策略课件(PPT 71页)

转基因模型是研究基因功能的主要手段
第一节 转基因技术
一.转基因生物的意义
二、基本原理
基本原理
基本过程
1. 上游—基因改造和载体构建
动物转基因常用的载体
2.  中游—基因转移、胚胎移植与建系
1)  DNA显微注射法
DNA 显微注射
DNA 显微注射法的特点
提高显微注射 DNA 表达的成功率
2) 胚胎干细胞法
胚胎干细胞法
胚胎干细胞的分离和培养
胚胎干细胞外源 DNA 的导入
外源 DNA 的整合
胚胎干细胞法的特点
3）逆转录病毒感染法
逆转录病毒感染法
逆转录病毒感染法的特点
4）精子载体法
3. 下游—基因整合与表达检测及筛选
鉴定方法
基因转移鼠纯合鼠系的建立
三、转基因动物的应用
人类疾病的转基因动物模型
利用转基因动物反应器生产药用蛋白
转基因改良移植器官
动物的克隆
核移植技术（Nuclear Transfer)
第二节  基因打靶
一、基因打靶的基本程序
1. 打靶载体的构建
2. 打靶载体导入ES细胞
打靶载体的正-负选择
打靶载体的正筛选
打靶载体的负筛选
PCR 鉴定
PCR 鉴定：特异整合
基因敲除小鼠的获得
基因敲除和 RNA 干扰
第三节 RNA 干扰
RNA 干扰是dsRNA 导致的基因沉默
RNAi 是真核生物中广泛存在的现象
RNA 干扰
siRNA 的产生
siRNA 诱导同源序列的降解
基因沉默的机制是多方面的
RNAi 和基因敲除
dsRNA 能够诱发细胞的抗病毒反应
siRNA 与 shRNA
shRNA 表达载体系统
miRNA 表达载体系统
siRNA 设计原则
shRNA 与 siRNA 应用的局限
shRNA 与 siRNA 的比较
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