转化子的筛选与重组子的鉴定培训教材(PPT 35页)

转化子的筛选与重组子的鉴定
为什么要进行转化子的筛选和重组子的鉴定？
三者的关系
转化子的筛选与重组子的鉴定方法
噬菌斑筛选法
PCR鉴定法
菌落原位杂交法
原位杂交的操作程序
探针的制备
探针的标记
5＇端标记法
缺刻前移标记法
蛋白质生物功能检测法
放射免疫原位检测法
蛋白凝胶电泳检测法
在DNA体外重组实验中，
外源DNA片段与载体DNA的连接反应物一般不经分离直接用于转化，
再加上重组率和转化率的不理想，
因此必须通过筛选和鉴定来区分转化子与非转化子、
重组子与非重组子、期望重组子与非期望重组子。
转化子：接纳载体或重组分子的转化细胞。
非转化子：为接纳载体或重组分子的非转化细胞。
重组子：含有重组DNA分子的转化子。
非重组子：仅含有空载载体分子的转化子。
期望重组子：含有目的基因的重组子。
非期望重组子：不含目的基因的重组子
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