生产菌株的筛选及腈水合酶催化反应条件优化(DOC 49页)

2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1菌种
2.1.2培养基
2.1.3主要试剂
2.1.4主要仪器
2.2.1菌种培养方法
2.2.2高酶活烟酰胺生产菌种的诱变及选育
2.2.4烟酰胺的提取
2.2.5烟酰胺生产过程中酶催化反应条件优化
3.1.1 ARTP诱变
3.1.2微波诱变
3.1.3 EMS诱变
3.1.4 复合诱变
3.1.5突变菌株的遗传稳定性实验
3.1.6烟酰胺高产菌株NHD-1生长曲线的测定
3.1.7生长过程中腈水合酶活性的测定
3.1.8 实验小结
3.1烟酰胺高产菌株初筛
3.2.1烟酰胺标准曲线绘制
3.2.2 HPLC紫外检测波长的确定
3.2.3 HPLC流动相流量的确定
3.2.4 HPLC流动相比例的确定
3.2.5 HPLC检测最佳条件
3.2烟酰胺检测条件优化
3.3烟酰胺提取
3.4.1菌体浓度的确定
3.4.2菌龄的确定
3.4.3底物浓度的确定
3.4.4温度的确定
3.4.5 PH的确定
3.4.6 最佳反应时间
3.4.7 烟酰胺浓度对腈水合酶活力的影响
3.4.8响应面法优化烟酰胺生产条件
3.4.9实验小结
3.4烟酰胺生产过程中酶催化反应条件优化
3.5结论
图1-1 NSA分子式
图1-2 烟酸分子式
图2-1 烟酰胺和3-氰基吡啶出峰时间图
图3-1 ARTP诱变致死率曲线与突变率变化图
图3-10 烟酰胺标准曲线
图3-11 烟酰胺与3-氰基吡啶紫外吸收光谱图
图3-12 不同紫外检测波长下烟酰胺出峰情况
图3-13 不同流动相流量下烟酰胺出峰情况
图3-14不同流动相流量比例下烟酰胺出峰情况
图3-15 产物提取后烟酰胺成品图片
图3-16 提取后产物与烟酰胺标品检测结果
图3-17 不同菌体浓度下腈水合酶活性
图3-18 不同菌龄下腈水合酶活性
图3-19 不同底物浓度下腈水合酶活性
图3-2 不同微波强度时致死率曲线与突变率变化图
图3-20 不同温度下腈水合酶活性
图3-21 不同PH下腈水合酶活性
图3-22 不同反应时间下腈水合酶活性
图3-23 不同烟酰胺浓度下腈水合酶活性
图3-24 优化结果响应分析图
图3-25 回归模型分析结果验证
图3-3 不同微波诱变时间时致死率曲线与突变率变化图
图3-4 不同EMS浓度时致死率曲线与突变率变化图
图3-5 复合诱变后腈水合酶的酶活力
图3-6 复合诱变后菌落不同形态图
图3-7 突变株遗传稳定性变化图
图3-8 菌株NHD-1生长曲线图
图3-9生长过程中NHD-1酶活变化图
表2-1 主要试剂规格及生产厂家
表2-2 主要仪器型号及生产厂家
表2-3 Plackett-Burman实验设计
表3-1 复合诱变后菌落不同形态特性
表3-2 Plackett-burman实验设计
表3-3 各影响因素显著性分析
表3-4 响应面优化设计中各因素水平
表3-5 响应面优化设计设计
表3-6 SAS统计分析主要结果
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