DNA重组克隆的单元操作课程(PPT 110页)

第二节工具酶
一、限制性核酸内切酶（Restrictionendonuclease,RE）
（1）限制（Restriction）
（2）修饰（Modification）
（二）限制性内切酶的类型
1.I型限制性内切酶
（3）切割位点
2.II类限制性内切酶
（4）粘性末端
②3’端凸出（如PstI切点）
粘性末端的意义
②5’末端标记
（5）II型限制性核酸内切酶的切割方式
3.III类限制性内切酶
（三）限制性内切酶的命名
（四）影响限制性内切酶活性的因素
2.DNA的甲基化程度
3.温度
4.缓冲液(Buffer)
使用的时候要特别注意！
（五）限制性内切酶对DNA的消化
2.完全消化
3.局部消化
4.限制酶酶切反应的终止
二、甲基化酶
三、DNA连接酶(DNAligase)
一、限制性核酸内切酶
三、DNA连接酶
四、基因工程中常用的DNA聚合酶：
1.大肠杆菌DNA聚合酶
2.Klenowfragment
3.T4噬菌体DNA聚合酶
4.T7噬菌体DNA聚合酶
5.耐热DNA聚合酶
6.反转录酶
7.末端转移酶
五、T4多核苷酸激酶
六、碱性磷酸酶
七、核酸酶
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