重组DNA表达系统课件(PPT 120页)

重组DNA表达系统天津科技大学生物工程学院罗学刚
体系选择
一、体外表达系统（无细胞表达系统）
二、原核表达系统
（一）大肠杆菌表达系统
大肠杆菌表达载体分类
常用表达载体
特殊的表达用菌株
外源基因在原核细胞中的表达形式
融合基因的表达
融合蛋白的特点
融合方式
各种融合蛋白表达载体
各种用于抗体识别的标记
让表达产物可溶化
让蛋白质分泌到间质去
融合蛋白的专一性切割
分泌型表达
分泌型载体的优点
非融合蛋白的表达
包含体（包涵体）
包含体来源蛋白质的复性
（二）枯草芽孢杆菌表达系统
其他
三、真核表达系统
（一）酵母表达系统
（二）昆虫细胞表达系统
（三）哺乳动物细胞表达系统
新霉素抗性选择系统
外源基因导入哺乳动物细胞
转染方法
磷酸钙法
脂质体
显微注射法
电穿孔转染法（electroporation）
以病毒为载体的生物学转染法
外源基因在真核细胞中的表达方式
瞬时表达系统
稳定表达系统
（四）转基因植物
转基因植物表达体系的问题及解决方案
（五）转基因动物技术及其新药研发中的应用
一、转基因动物的技术研究
▲方法：
1.原核显微注射法
▲原核显微注射法优缺点：
2．多能性干细胞法
▲胚胎干细胞法的优缺点：
缺点：许多嵌合体转基因动物生殖细胞内不含有转基因，须进一步杂交才能获得转基因动物。
3．病毒载体法
▲病毒载体法优缺点：
4．精子介导的基因转移法
5．核转移法
与DNA显微注射法相比：
6.转基因动物的诱导表达系统
tet系统：
Cre/loxP重组酶系统
二、转基因动物在新药研发中的应用
1．药物作用靶点的研究与发现
2．转基因动物模型在新药筛选中的应用
一些已成功构建的转基因动物疾病模型
3．转基因动物生物反应器生产蛋白质类药物
部分已成功采用转基因动物乳腺生物反应器表达的药用蛋白质
谢谢大家！

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