脊髓肿瘤坏死与切割损伤导致的机械行业(PDF 37页)

主要内容：
用TNF．Ⅸ抗体进行免疫组织化学染色(SABC法)，脊髓切片采用漂浮法，主要过程如下：
1．冰冻切片10mm，室温放置30分钟后，放入4。C多聚甲醛固定10分钟，PBS振动漂洗5分钟×3次；
2．3％H。0：室温孵育5’10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性；
3．PBS振动漂洗5分钟x 3次；
4．入含0．3％Triton X-100的5％正常牛血清(PBS稀释)封闭，室温孵育l小时；
5．倾去血清，滴加含0．1％Triton X一100的多克隆兔抗TNF一0【(1：1000)，4℃冰箱孵育过夜；
6．PBS振动漂洗，5分钟x 3次；
7．滴加羊抗兔IgG，37"C孵育2．5小时；
8．PBS振动漂洗，5分钟×3次；
9．滴加生物素一卵白素一辣根过氧化物酶复合物(ABC，临用前30分钟配置)，室温孵育一小时；
10．PBS冲洗，5分钟×3次；
11．新鲜配制的含0．03％H：O。的0．05％DAB显色液室温避光显色5分钟，PBS终止反应：
12．裱片，自然干燥，常规脱水透明，中性树胶封片。
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